برای این آزمایش، خونگیری از ورید بازویی انجام می شود. قبل از نمونه گیری، فرد مراجعه کننده باید داروهایی که مصرف می کند به همراه آخرین زمان مصرف دارو را به اطلاع پرسنل نمونه گیر در آزمایشگاه برساند.

وجود انواع هموگلوبین می تواند در اندازه گیری هموگلوبین HbA1c اختلال ایجاد کند. مزیت استفاده از روش‌های کروماتوگرافی تبادل یونی این است که اکثر انواع هموگلوبین که بر نتایج HbA1c تأثیر می‌گذارند را می‌توان از تجزیه و تحلیل کروماتوگرام تشخیص داد، بنابراین نتایج نادرست کمتر گزارش می‌شوند.

بسیاری از انواع رایج هموگلوبین () (HbF <30٪، HbE هتروزیگوت، HbD هتروزیگوت، HbC هتروزیگوت، HbS هتروزیگوت) با این روش تداخلی ندارند. سایر انواع Hb که تداخلی با این روش نشان می دهند عبارتند از

 Hb Camperdown، Hb Fukuoka، Hb Philadelphia، Hb Wayne و Hb Raleigh هستند. برخی از هموگلوبینوپاتی ها می توانند با کاهش طول عمر گلبول های قرمز همراه باشند،در این شرایط اندازه گیری غلظت HbA1c مقدار واقعی کنترل قند خون بیمار را ارائه نمی دهد و می تواند منجر به تفسیر نادرست شود. در چنین شرایطی، فروکتوزامین باید به عنوان یک اندازه گیری جایگزین برای گلیسمی استفاده شود و برای نظارت بر این بیماران توصیه می شود.

در موارد کم خونی همولیتیک، طول عمر گلبول های قرمز کوتاه شده و منجر به کاهش نتایج HBA1c می شود. این اثر به شدت کم خونی بستگی دارد. نمونه های بیماران مبتلا به پلی سیتمی یا پس از طحال برداشتن ممکن است مقادیر HBA1c را به دلیل طول عمر طولانی تر گلبول های قرمز،بالاتر نشان دهند..